疾病模型＆免疫缺陷鼠
db/db小鼠
db/db 小鼠為瘦素受體自發性突變小鼠，由 Bar Harbor 于 1966 年在 C57BLKS/J（BKS）近交系中發現。
特征
1.多食、消渴、多尿、極度肥胖。表型的嚴重程度受基因背景的影響。
2.表現出心肌病、周圍神經病變、糖尿病視網膜病變、傷口愈合遲滯等糖尿病并發癥。
3.易肥胖，體重增長快，活動減少，血脂高，幼年時血糖和胰島素增長不明顯，后期血糖和胰島素水平上升。
4.相對于野生型小鼠，db/db 小鼠能夠增加胰島素的敏感性，脂肪細胞也有所增加。
用途
db/db 小鼠用于糖尿病與肥胖、代謝、傷口愈合、免疫與炎癥、內分泌、生殖等方面的研究。T2D 型糖尿病模型，應用于糖尿病的藥物篩選、肥胖癥的生理生化指標及藥物治療等的研究。
dbdb小鼠血糖
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樣本信息和目的
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樣本：db/db小鼠
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目的：確認db/db小鼠基因修飾類型
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靶基因：Lepr leptin receptor
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Gene ID：16847
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NCBI鏈接：https//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/16847
方法和結果
LRPR（leptin receptor，瘦素受體，又名db ）蛋白屬于細胞因子受體 gp130 家族，該蛋白通過激活胞質 STAT蛋白來刺激基因轉錄。LRPR 是瘦素（調節體重的脂肪細胞特異性激素）的受體，并參與脂肪代謝的調節以及正常淋巴細胞生成所需要的新型造血途徑。該基因的突變與肥胖和垂體功能障礙有關。Lepr基因位于小鼠 4 號染色體上，有 21 個外顯子（圖1）。
文獻查詢顯示，db/db 小鼠 Lepr 基因中內含子從 G 到 T 的轉化產生了一個供體剪接位點，該剪接位點導致異常剪接，導致 Ob-Rb 剪接形式的長細胞結構域過早終止，失去其信號轉導功能，我們以 db/db 小鼠、C57 小鼠（6-10）和灰色小鼠（m/m）的基因組為模板、使用文獻（Acta Pharmacologica Sinica (2018) 39: 117–123）中報道的引物：
FO-1：5′-TTGTTCCCTTGTTCTTATACCTATTCTGA-3′
RO-1：5′-CTGTAACAAAATAGGTTCTGACAGCAAC-3′
FI-1：5′- ATTAGAAGATGTTTACATTTTGATGGAAGG-3′
RI-1：5′- GTCATTCAAACCATAGTTTAGGTTTGTCTA-3′
純合子：610bp 和 406bp；野生型：610bp 和 264bp；雜合子：610bp、406bp 和 264bp 進行 Lepr 基因的擴增，結果顯示：db/db 純合子表現出 610bp 和 406bp 兩條帶，C57 小鼠（6-10）和灰色小鼠（m/m）表現出 610bp 和406bp 兩條帶，符合文獻報道。同時對 db/db 小鼠的 610bp 條帶進行測序，結果顯示在內含子 18（轉錄本 201E18-E19 中）上有一個 G 到 T 的突變。此外，為了鑒定 db/db 小鼠 lepr 基因無其他突變，我們對 Lepr 基因的外顯子進行全測序。Lepr 基因有多個轉錄本信息（圖 2），為了檢測 db/db小鼠基因突變類型，我們使用轉錄本 201（外顯子有 19 個）設計各外顯子的 PCR擴增和測序引物（表 1），并對 db/db 小鼠的 DNA 模板進行 19 個外顯子進行 PCR 擴增和測序。
http://asia.ensembl.org/Mus_musculus/Tran/Exons?db=core;g=ENSMUSG00000057722; r=4:101717404-101815352;t=ENSMUST0000003755
結論
斯貝福（北京）生物技術有限公司db/db小鼠的基因編輯類型為：Lepr基因內含子 18（轉錄本201 E18-E19中）上有一個 G 到 T 的突變。
